 |
|
 |
|
 |
|
 |
|
 |
 |
 |
|
 |
|
 |
|
 |
|
 |
|
 |
|
 |
|
 |
|
|
Evaluación del tratamiento con Inhibidores de Sustratos en la Enfermedad de Niemann-Pick tipo C. En este trabajo se presenta el primer análisis mutacional exhaustivo de pacientes españoles con enfermedad de Niemann-Pick A/B. En concreto, se realizó un análisis molecular de 19 pacientes españoles y 2 pacientes del Magreb. Se pudieron identificar todos los alelos mutantes del gen SMPD1, que incluyeron 17 mutaciones diferentes, de las cuales 10 no habían sido descritas previamente. Las únicas mutaciones relativamente frecuentes fueron la p.R608 del (38%) y la p.A482E (9%). Se pudieron establecer correlaciones genotipo-fenotipo para la mayoría de las mutaciones, confirmándose la correlación entre la mutación p.R608 y el tipo B de la enfermedad. Por otra parte, se pudo comprobar la patogenicidad de las mutaciones mediante la expresión de los alelos mutados. En el caso de una mutación que afectaba a un sitio dador de splicing no canónico se realizó un análisis a nivel de RNA y se comprobó que dicho alelo sólo daba lugar a mRNAs aberrantes. Dr. Daniel Grinberg Dra. Luïsa Vilageliu Facultad de Biología – Universidad de Barcelona – Genética CIBER de enfermedades raras (CIBERER) Las mutaciones llamadas sin sentido y las que cambian la pauta de lectura, como algunas deleciones e inserciones, dan lugar a una proteína NPC1 truncada. El mecanismo de nonsense-mediated mRNA decay (NMD) es un proceso celular que degrada RNAs mensajeros que codifican para estas proteínas truncadas. En este estudio hemos analizado las mutaciones con estas características presentes en pacientes con la enfermedad de Niemann-Pick tipo C y que además cumplen los criterios teóricos para ser candidatas a sufrir el proceso de NMD. Los resultados obtenidos mediante la utilización de la técnica de PCR cuantitativa nos han demostrado que los mRNAs de estos pacientes sufren NMD en todos los casos. Por lo tanto, hemos demostrado y confirmado que este proceso natural que la célula tiene para evitar la fabricación de proteínas anómalas conocido como NMD está presente en la enfermedad de NPC para las mutaciones estudiadas. Dra. María José Coll, Dra. J. Macías-Vidal Instituto de Bioquímica Clínica de Barcelona Hospital Clínic - Servicio de Bioquímica y Genética Molecular Premios FEEL de Investigación 2010 La enfermedad de Niemann-Pick tipo C es una enfermedad autosómica recesiva causada por mutaciones en el gen NPC1 o en el gen NPC2. Mientras que la mayoría de las mutaciones son de cambio de sentido (missense), también se han descrito unas pocas que afectan el proceso de splicing. En este trabajo se identificó y caracterizó una nueva mutación puntual, c.1554-1009G>A, situada en el intrón 9 del gen NPC1 en un paciente español. La secuenciación del cDNA del paciente mostró que esta mutación intrónica crea un sitio críptico dador de splicing, resultando en la incorporación en el ARNm de 194 pb del intrón 9, como nuevo exón (pseudoexón). Este nuevo tránscrito tiene un codón de terminación prematura y es degradado por el mecanismo de mRNA decay (NMD). La utilización de un minigen permitió comprobar experimentalmente que la mutación puntual genera la inclusión del pseudoexon. Como aproximación terapéutica se diseñó un oligonucleótido antisentido (morfolino), complementario al sitio de splicing críptico y se transfectó en fibroblastos del paciente. Usando esta estrategia, se restableció el splicing normal. Estos resultados ponen de manifiesto la importancia del análisis de las regiones intrónicas profundas y demuestran la eficacia de la terapia con oligonucleótidos antisentido para el tratamiento de enfermedades causadas por mutaciones que generan pseudoexones. Dra. Laura Rodríguez-Pascau Dra. Luïsa Vilageliu Dr. Daniel Grinberg Dra. María José Coll Facultad de Bilogía – Universidad de Barcelona – Genética CIBER de enfermedades raras (CIBERER) Instituto de Biomedicina de la Universidad de Barcelona (IBUB) Instituto de Bioquímica Clínica de Barcelona Hospital Clinic – Servicio de Bioquímica y Genética Molecular La enfermedad de Niemann – Pick tipo C (NPC) es una enfermedad hereditaria neurovisceral de depósito lipídico lisososmal caracterizada por deterioro neurológico progresivo. Se han definido diferentes formas clínicas basadas en la edad de inicio de la sintomatología: perinatal, Infantil Precoz (IP), Infantil Tardía (IT), Juvenil (J) y del Adulto. Evaluamos la eficacia y tolerabilidad del tratamiento con Miglustat en 16 pacientes sintomáticos con Enfermedad de Niemann – Pick tipo C, incluyendo un paciente asintomático no tratado. Todos los pacientes fueron clasificados de acuerdo a la edad de inicio de la sintomatología neurológica y se valoraron aplicando un protocolo de valoración clínica: escalas de discapacidad y función cognitiva, tomografía por emisión de positrones (PET) y marcadores bioquímicos. Las evaluaciones mediante PET y escala de discapacidad indicaron que el metabolismo cerebral y la sintomatología neurológica se estabilizaron durante el tratamiento en los pacientes con forma Juvenil de NPC. Los pacientes con la forma Infantil Precoz e Infantil Tardía, en los que la enfermedad era más grave al inicio del tratamiento, mostraron puntuaciones más altas en la escala de discapacidad y progresivo hipometabolismo cerebral durante el seguimiento. De la misma forma, las puntuaciones en la escala cognitiva permanecieron estables en los pacientes con la forma Juvenil, mostrando deterioro en la formas IP e IT. La actividad plasmática de quitotriosidasa (ChT) era más baja en las formas Juveniles que en los pacientes IP e IT y aumentó en los pacientes que abandonaron el tratamiento. Miglustat fue bien tolerado; algunos efectos adversos incluyeron diarrea que fue satisfactoriamente tratada con Loperamida y medidas dietéticas. Miglustat estabilizó la sintomatología neurológica en pacientes con la forma Juvenil de la enfermedad, aunque los beneficios terapéuticos parecen menores en los pacientes con las otras formas clínicas de la enfermedad que presentan un estadío avanzado de la misma al inicio del tratamiento. M. Pineda,1 M.S. Perez-Poyato,1 M. O’Callaghan,1 M.A. Vilaseca,1 M. Pocovi,2 R. Domingo,3 L. Ruiz Portal,4 A. Verdú Pérez,5 T. Temudo,6 A. Gaspar,7 J.J. Garcia Peñas,8 S. Roldán,9 L. Martín Fumero,10 O. Blanco de la Barca,11 M.T. García Silva,12 J. Macías-Vidal,13 M.J. Coll13 1Departamento de Neurología Pediátrica y Bioquímica Clínica, Hospital Sant Joan de Déu, Barcelona, y centro para la investigación biomédica en enfermedades raras (CIBER-ER), Instituto de Salud Carlos III; 2 Departamento de Bioquímica y Biología Celular y Molecular, Universidad de Zaragoza; 3Hospital Virgen de la Arrixaca, Murcia, 4 Hospital Virgen del Rocio, Sevilla. 5Hospital Virgen de la Salud, Toledo, 6Hospital Santo Antonio General, Oporto, Portugal; 7Hospital Santa María, Lisboa, Portugal; 8Hospital Niño Jesus, Madrid; 9Hospital Virgen de las Nieves, Granada, 10Hospital Ntra. Sra. Candelaria, Tenerife; 11Hospital de Vigo, Pontevedra; 12Unidad Pediátrica de Enfermedades raras, Hospital 12 de Octubre, Madrid; 13Institut de Bioquímica Clínica. Hospital Clínic, Barcelona CIBERER. Las mutaciones en el gen NPC1 o NPC2 son responsables de la enfermedad de Niemann-Pick tipo C (NPC) (OMIM # 257220), un trastorno autosómico recesivo neurodegenerativo de almacenamiento lisosomal causado por una regulación incorrecta del tráfico intracelular de lípidos. El análisis molecular realizado a 30 pacientes no relacionados permitió identificar 43 mutaciones diferentes en el gen NPC1, de las cuales 12 no habían sido descritas previamente. Los nuevos alelos NPC1 mutados fueron cuatro cambios de aminoácido (p.F995L, p.F1079S, p.L1106P y p.G1209E), una mutación sin sentido (p.E1089X), una inserción de 1-bp (p.L1117PfsX4), una deleción de un aminoácido (p.N916del), cuatro cambios intrónicos (c.58-3280C>G, c.882-28A>T, c.2604+5G>A y c.3591+5G>A) que afectan al mecanismo de splicing, y la primera deleción descrita en la enfermedad de NPC que incluye todo el gen. Para todas las mutaciones de splicing, se confirmó la formación de transcritos anormales mediante el análisis del cDNA, y también fue evaluada la degradación del mRNA a causa del proceso de nonsense-mediated mRNA decay. Tal como se había descrito anteriormente en esta enfermedad, las correlaciones genotipo-fenotipo son limitadas debido al gran número de mutaciones privadas. Nosotros describimos por primera vez un paciente homocigoto para la mutación p.I1061T, el cual presentó el fenotipo clínico infantil precoz, y otro paciente con el fenotipo bioquímico variante, cuya presentación clínica fue la forma neonatal de la enfermedad.
La enfermedad de Niemann-Pick tipo C es una enfermedad autosómica recesiva causada por mutaciones en cualquiera de los dos genes, o NPC1 NPC2, que codifican proteínas implicadas en la regulación de su transporte y / o la transformación de libre colesterol. Existen varios tipos de lípidos como el colesterol libre (no esterificado), la esfingosina, esfingomielina, fosfolípidos y glicoesfingolípidos (glucosilceramida y gangliósidos GM2 y GM3) se acumulan en los lisosomas y los endosomas tardíos de las células, con concentraciones pronunciada en el hígado y el bazo. La prueba clave para el diagnóstico de laboratorio para el NP-C es filliping tinción de fibroblastos de piel cultivados por parte del paciente, para demostrar la acumulación de colesterol en lisosomas secundarios para el transporte de alteración del colesterol intracelular. La sintomatología y la tasa de progresión de la enfermedad están fuertemente influenciadas por la edad de inicio de la enfermedad y las diferentes formas clínicas se han descrito en esta base: perinatal, Los primeros-infantil (EI), de finales del infantil (LI), formas juveniles y adultos. Los síntomas clínicos incluyen un deterioro neurológico progresivo organomegalia y visceral. Hoy en día no existe un tratamiento totalmente efectivo, sólo medidas de apoyo para el alivio de manifestaciones específicas de la enfermedad. La intervención para frenar la progresión de la enfermedad es la terapia más prometedora. Un número de enfermedades experimentales - terapias específicas, sobre la base de la patología molecular de NP-C, han sido probados en la celda la cultura y modelos animales como neuroesteroides, colesterol - aglutinantes, la curcumina y Miglustat. En este trabajo se resume los acontecimientos recientes que se han investigado para el tratamiento en pacientes y modelos animales con APN. Los actuales enfoques terapéuticos se han clasificado sobre la base de la orientación de la función celular, el anti – apoptóticas mecanismos celulares y la terapia de células madre. María S. Pérez-Poyato (1) y Mercé Pineda (2) 1.- Hospital Sant Joan de Déu, Passeig de Sant Joan de Déu de N º 2, Esplugues, Barcelona 8950, España 2.- Centre Biomédica Investigación de Enfermedades Raras (CIBER-ER), Instituto de Salud Carlos III, Barcelona, España. En el 95% de los casos, la enfermedad de Niemann-Pick tipo C está causada por alteraciones en el gen NPC1, la mayoría de las cuales son mutaciones de cambio de sentido, de las que se conoce que algunas reducen la expresión proteica. En este trabajo se ha estudiado si las mutaciones españolas de cambio de sentido causan pérdida de la proteína NPC1 debido al incremento de la tasa de degradación y se han analizado las posibles vías responsables. Los resultados obtenidos indican que determinadas mutaciones provocan una ausencia parcial o total de la proteína NPC1 debido a una afectación de la estabilidad de la misma. Además, el tratamiento con inhibidores proteasomales de los fibroblastos de pacientes con estas mutaciones suprime parcialmente la pérdida de la proteína NPC1. Estos resultados abren la puerta a una futura aproximación terapéutica para los pacientes que presentan estas mutaciones. Macías-Vidal, Judit (1); Bachs, Oriol (2); Coll, María José (1) 1.- Institut de Bioquímica Clínica, Servei de Bioquímica i Genètica Molecular, Hospital Clínic. CIBER de Enfermedades Raras (CIBERER). IDIBAPS, Barcelona 2.- Departament de Biologia Cel·lular, Immunologia i Neurociències, Facultat de Medicina, Universitat de Barcelona. IDIBAPS, Barcelona Artículo elaborado por la Dra. M.J.Coll del Instituto de Bioquímica Clínica. Corporació Sanitária Clinic, dirigido a familiares y colaboradores de nuestra fundación. En el mismo, la citada investigadora, nos acerca al mundo de la genética molecular y su relación con la enfermedad de Niemann Pick tipo C, las posibilidades del diagnóstico molecular y la importancia del diagnóstico bioquímico como diagnóstico definitivo. Hay que resaltar y agradecer la explicación sobre qué consiste la prueba de la "Filipina" que unida a imágenes obtenidas mediante microscopio hacen totalmente comprensible tan importante medio de diagnóstico. La Dra. M.J.Coll del Instituto de Bioquímica Clínica de Barcelona e investigadora principal en la identificación de las alteraciones genéticas responsables de esta enfermedad, ha comunicado a la fundación el protocolo de remisión de muestras para el análisis genético. esta primera remisión contempla el envío de muestras de padres y pacientes. Existe la posibilidad de remitir en un solo envío las muestras de este estudio genético y las del estudio de las enzimas antioxidantes que está elaborando la Dra. M. Pineda en el hospital Sant Joan de Deu de Barcelona. El consentimiento informado y la realización de un árbol genealógico familiar son esenciales para este estudio, y deberán remitirse junto con las muestras. Estudio promovido por la Dra. M. Pineda del hospital de Sant Joan de Deu de Barcelona acerca de la implicación del sistema antioxidante en la enfermedad Niemann Pick tipo C. Primer proyecto de investigación científica que se realiza en España, el cual permitirá establecer la prevalencia de las alteraciones genéticas responsables de esta enfermedad, ampliar las posibilidades de diagnóstico y de prevención (detección de portadores y diagnóstico prenatal), a parte de aportar criterios para la evolución de la terapia más idónea a considerar en cada caso. |
 |