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Evaluación del tratamiento con Inhibidores de Sustratos en la Enfermedad de Niemann-Pick tipo C. En este trabajo se presenta el primer análisis mutacional exhaustivo de pacientes españoles con enfermedad de Niemann-Pick A/B. En concreto, se realizó un análisis molecular de 19 pacientes españoles y 2 pacientes del Magreb. Se pudieron identificar todos los alelos mutantes del gen SMPD1, que incluyeron 17 mutaciones diferentes, de las cuales 10 no habían sido descritas previamente. Las únicas mutaciones relativamente frecuentes fueron la p.R608 del (38%) y la p.A482E (9%). Se pudieron establecer correlaciones genotipo-fenotipo para la mayoría de las mutaciones, confirmándose la correlación entre la mutación p.R608 y el tipo B de la enfermedad. Por otra parte, se pudo comprobar la patogenicidad de las mutaciones mediante la expresión de los alelos mutados. En el caso de una mutación que afectaba a un sitio dador de splicing no canónico se realizó un análisis a nivel de RNA y se comprobó que dicho alelo sólo daba lugar a mRNAs aberrantes. Dr. Daniel Grinberg Dra. Luïsa Vilageliu Facultad de Biología – Universidad de Barcelona – Genética CIBER de enfermedades raras (CIBERER) Las mutaciones llamadas sin sentido y las que cambian la pauta de lectura, como algunas deleciones e inserciones, dan lugar a una proteína NPC1 truncada. El mecanismo de nonsense-mediated mRNA decay (NMD) es un proceso celular que degrada RNAs mensajeros que codifican para estas proteínas truncadas. En este estudio hemos analizado las mutaciones con estas características presentes en pacientes con la enfermedad de Niemann-Pick tipo C y que además cumplen los criterios teóricos para ser candidatas a sufrir el proceso de NMD. Los resultados obtenidos mediante la utilización de la técnica de PCR cuantitativa nos han demostrado que los mRNAs de estos pacientes sufren NMD en todos los casos. Por lo tanto, hemos demostrado y confirmado que este proceso natural que la célula tiene para evitar la fabricación de proteínas anómalas conocido como NMD está presente en la enfermedad de NPC para las mutaciones estudiadas. Dra. María José Coll Instituto de Bioquímica Clínica de Barcelona Hospital Clínic - Servicio de Bioquímica y Genética Molecular La enfermedad de Niemann-Pick tipo C es una enfermedad autosómica recesiva causada por mutaciones en el gen NPC1 o en el gen NPC2. Mientras que la mayoría de las mutaciones son de cambio de sentido (missense), también se han descrito unas pocas que afectan el proceso de splicing. En este trabajo se identificó y caracterizó una nueva mutación puntual, c.1554-1009G>A, situada en el intrón 9 del gen NPC1 en un paciente español. La secuenciación del cDNA del paciente mostró que esta mutación intrónica crea un sitio críptico dador de splicing, resultando en la incorporación en el ARNm de 194 pb del intrón 9, como nuevo exón (pseudoexón). Este nuevo tránscrito tiene un codón de terminación prematura y es degradado por el mecanismo de mRNA decay (NMD). La utilización de un minigen permitió comprobar experimentalmente que la mutación puntual genera la inclusión del pseudoexon. Como aproximación terapéutica se diseñó un oligonucleótido antisentido (morfolino), complementario al sitio de splicing críptico y se transfectó en fibroblastos del paciente. Usando esta estrategia, se restableció el splicing normal. Estos resultados ponen de manifiesto la importancia del análisis de las regiones intrónicas profundas y demuestran la eficacia de la terapia con oligonucleótidos antisentido para el tratamiento de enfermedades causadas por mutaciones que generan pseudoexones. Dra. Laura Rodríguez-Pascau Dra. Luïsa Vilageliu Dr. Daniel Grinberg Dra. María José Coll Facultad de Bilogía – Universidad de Barcelona – Genética CIBER de enfermedades raras (CIBERER) Instituto de Biomedicina de la Universidad de Barcelona (IBUB) Instituto de Bioquímica Clínica de Barcelona Hospital Clinic – Servicio de Bioquímica y Genética Molecular Artículo elaborado por la Dra. M.J.Coll del Instituto de Bioquímica Clínica. Corporació Sanitária Clinic, dirigido a familiares y colaboradores de nuestra fundación. En el mismo, la citada investigadora, nos acerca al mundo de la genética molecular y su relación con la enfermedad de Niemann Pick tipo C, las posibilidades del diagnóstico molecular y la importancia del diagnóstico bioquímico como diagnóstico definitivo. Hay que resaltar y agradecer la explicación sobre qué consiste la prueba de la "Filipina" que unida a imágenes obtenidas mediante microscopio hacen totalmente comprensible tan importante medio de diagnóstico. La Dra. M.J.Coll del Instituto de Bioquímica Clínica de Barcelona e investigadora principal en la identificación de las alteraciones genéticas responsables de esta enfermedad, ha comunicado a la fundación el protocolo de remisión de muestras para el análisis genético. esta primera remisión contempla el envío de muestras de padres y pacientes. Existe la posibilidad de remitir en un solo envío las muestras de este estudio genético y las del estudio de las enzimas antioxidantes que está elaborando la Dra. M. Pineda en el hospital Sant Joan de Deu de Barcelona. El consentimiento informado y la realización de un árbol genealógico familiar son esenciales para este estudio, y deberán remitirse junto con las muestras. Estudio promovido por la Dra. M. Pineda del hospital de Sant Joan de Deu de Barcelona acerca de la implicación del sistema antioxidante en la enfermedad Niemann Pick tipo C. Primer proyecto de investigación científica que se realiza en España, el cual permitirá establecer la prevalencia de las alteraciones genéticas responsables de esta enfermedad, ampliar las posibilidades de diagnóstico y de prevención (detección de portadores y diagnóstico prenatal), a parte de aportar criterios para la evolución de la terapia más idónea a considerar en cada caso. |
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